Dithiothreitol (DTT) అనేది సాధారణంగా ఉపయోగించే తగ్గించే ఏజెంట్, దీనిని కొత్త ఆకుపచ్చ సంకలితం అని కూడా పిలుస్తారు.ఇది రెండు మెర్కాప్టాన్ సమూహాలతో (-SH) ఒక చిన్న పరమాణు కర్బన సమ్మేళనం.దాని తగ్గించే లక్షణాలు మరియు స్థిరత్వం కారణంగా, DTT బయోకెమిస్ట్రీ మరియు మాలిక్యులర్ బయాలజీ ప్రయోగాలలో విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది.
ప్రోటీన్లు మరియు ఇతర జీవఅణువులలో డైసల్ఫైడ్ బంధాలను తగ్గించడం DTT యొక్క ప్రధాన పాత్ర.డైసల్ఫైడ్ బంధం ప్రోటీన్ మడత మరియు స్థిరత్వం యొక్క ముఖ్యమైన భాగం, అయితే తగ్గించదగిన SDS-PAGE విశ్లేషణ, ప్రోటీన్ రీకాంబినేషన్ మరియు మడత వంటి కొన్ని ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులలో, ప్రాదేశిక నిర్మాణాన్ని విప్పుటకు డైసల్ఫైడ్ బంధాన్ని రెండు థియోల్ సమూహాలకు తగ్గించడం అవసరం. ప్రోటీన్.DTT డైసల్ఫైడ్ బంధాలతో స్పందించి వాటిని మెర్కాప్టాన్ సమూహాలకు తగ్గించగలదు, తద్వారా ప్రోటీన్ యొక్క ప్రాదేశిక నిర్మాణాన్ని తెరుస్తుంది మరియు విశ్లేషించడం మరియు మార్చడం సులభం చేస్తుంది.
ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలు మరియు స్థిరత్వాన్ని రక్షించడానికి కూడా DTTని ఉపయోగించవచ్చు.కొన్ని ఎంజైమ్-ఉత్ప్రేరక ప్రతిచర్యలలో, ఎంజైమ్ యొక్క కార్యాచరణ ఆక్సిడెంట్ ద్వారా తగ్గించబడుతుంది.DTT ఆక్సిడెంట్లతో చర్య జరిపి వాటిని హానిచేయని పదార్ధాలకు తగ్గించి, తద్వారా ఎంజైమ్ యొక్క కార్యాచరణ మరియు స్థిరత్వాన్ని కాపాడుతుంది.
β-మెర్కాప్టోఇథనాల్ (β-ME) వంటి సాంప్రదాయ తగ్గించే ఏజెంట్లతో పోలిస్తే, DTT సురక్షితమైన మరియు మరింత స్థిరమైన తగ్గించే ఏజెంట్‌గా పరిగణించబడుతుంది.ఇది సజల ద్రావణంలో స్థిరంగా ఉండటమే కాకుండా, అధిక ఉష్ణోగ్రత మరియు యాసిడ్-బేస్ పరిస్థితులలో దాని తగ్గించే లక్షణాలను కూడా నిర్వహిస్తుంది.
DTT యొక్క ఉపయోగం చాలా సులభం.సాధారణంగా, DTT తగిన బఫర్‌లో కరిగించి, ఆపై ప్రయోగాత్మక వ్యవస్థకు జోడించబడుతుంది.DTT యొక్క సరైన గాఢత నిర్దిష్ట ప్రయోగం ప్రకారం నిర్ణయించబడాలి మరియు సాధారణంగా 0.1-1mM పరిధిలో ఉపయోగించబడుతుంది.తక్కువ సాంద్రతలు కణాల పెరుగుదలపై ప్రతికూల ప్రభావాలను తగ్గించగలవు మరియు లక్ష్య ప్రోటీన్ల యొక్క అతిగా ఎక్స్ప్రెషన్ కారణంగా సైటోటాక్సిసిటీని తగ్గించగలవు.అధిక సాంద్రతలు అధిక కణ జీవక్రియ భారాన్ని కలిగిస్తాయి, కణాల పెరుగుదల మరియు వ్యక్తీకరణ సామర్థ్యాన్ని ప్రభావితం చేస్తాయి.
వివిధ సాంద్రతలలో IPTG ఇండక్షన్ పరీక్షలను నిర్వహించడం ద్వారా లక్ష్య ప్రోటీన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిని అంచనా వేయడం సరైన ఏకాగ్రతను నిర్ణయించే మార్గం.IPTG సాంద్రతల శ్రేణిని ఉపయోగించి చిన్న-స్థాయి సంస్కృతి పరీక్షలు నిర్వహించబడతాయి (ఉదా. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, మొదలైనవి) మరియు లక్ష్య ప్రోటీన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిని గుర్తించడం ద్వారా వివిధ సాంద్రతలలో వ్యక్తీకరణ ప్రభావాన్ని అంచనా వేయవచ్చు (ఉదా. వెస్ట్రన్ బ్లాట్ లేదా ఫ్లోరోసెన్స్ డిటెక్షన్).ప్రయోగాత్మక ఫలితాల ప్రకారం, ఉత్తమ వ్యక్తీకరణ ప్రభావంతో ఏకాగ్రత సరైన ఏకాగ్రతగా ఎంపిక చేయబడింది.
అదనంగా, మీరు ఇలాంటి ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులలో సాధారణంగా ఉపయోగించే IPTG ఏకాగ్రత పరిధిని అర్థం చేసుకోవడానికి సంబంధిత సాహిత్యం లేదా ఇతర ప్రయోగశాలల అనుభవాన్ని కూడా సూచించవచ్చు, ఆపై ప్రయోగాత్మక అవసరాలకు అనుగుణంగా ఆప్టిమైజ్ చేయండి మరియు సర్దుబాటు చేయండి.
విభిన్న వ్యక్తీకరణ వ్యవస్థలు, లక్ష్య ప్రోటీన్లు మరియు ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులపై ఆధారపడి సరైన ఏకాగ్రత మారవచ్చని గమనించడం ముఖ్యం, కాబట్టి సందర్భానుసారంగా ఆప్టిమైజ్ చేయడం ఉత్తమం.
సారాంశంలో, DTT అనేది ప్రోటీన్లు మరియు ఇతర జీవఅణువులలో డైసల్ఫైడ్ బంధాలను తగ్గించడానికి మరియు ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలు మరియు స్థిరత్వాన్ని రక్షించడానికి సాధారణంగా ఉపయోగించే తగ్గించే ఏజెంట్.ఇది బయోకెమిస్ట్రీ మరియు మాలిక్యులర్ బయాలజీ ప్రయోగాలలో విస్తృతంగా ఉపయోగించబడింది.
పోస్ట్ సమయం: సెప్టెంబర్-28-2023